諾博萊德 核蛋白提取試劑盒（無去垢劑）

核蛋白提取試劑盒(無去垢劑）常備現貨

產品貨號：P5072

產品名稱：核蛋白提取試劑盒（無去垢劑）

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：核蛋白提取試劑盒（無去垢劑）

規格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P5072 核蛋白提取試劑盒（無去垢劑）

適用樣本：動物細胞/組織

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產品簡介：

核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動物細胞和各種動物實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等動物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便，可在 1 小時內完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。

本試劑盒的所有組份均不含去垢劑成分，最后得到的蛋白樣品的成分對 NI 柱純化、分子篩、離子交換、親和純化等下游應用沒有去垢劑影響。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質譜實驗的組份，最后得到的蛋白質樣品經過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質組學相關實驗研究。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品脫鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

適用樣本：細胞、組織。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液（pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X））（phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產品特點：

1. 使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

2. 將蛋白提取的時間縮短至 30 分鐘-1 小時。

3. 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

4. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5. 蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

6. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

5. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

6. Western實驗內參可以選用Lamin B、TBP、Histon H3。

二、細菌蛋白提取：

1.提取液制備：

每 500μl 冷的蛋白提取液 A 加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物和 1μl 磷酸酶抑制劑。

每 200μl 冷的蛋白提取液 B 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物和 1μl 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2.取 5-10×10⁶個細胞，在 4℃，500×g 力條件下離心 5 分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。

3.用冷 PBS 洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4.每 20μl 體積細胞沉淀（約 20 mg，2×10⁶個細胞）中加入 200-300μl 冷的提取液 A，高速渦旋振蕩混勻或吹打混勻，置 2-8℃條件振蕩 10-30 分鐘。

【注】：

1) 提取液 A 處理后細胞體積應減少，否則延長提取液 A 振蕩處理時間。

2) 如果需要同時收集胞質蛋白，可以稍微減少試劑 A 的用量，以提高獲得的胞質蛋白樣品的濃度。

3) 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

4) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

5.然后在 4℃，2000×g 條件下離心 5 分鐘。

6.將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請置于冰上或-80℃冰箱保存備用。

7.在沉淀中加入 80-200μl 冷的提取液 B，高速渦旋振蕩 15 秒。

【注】：

1) 加提取液 B 前，必須盡可能吸干提取液 A。否則會影響核蛋白純度。

2) 也可以用 PBS 將沉淀洗滌一次。PBS 重懸沉淀，12000g 離心 5 分鐘。

3) 提取液 B 用量根據實驗細胞數量情況調整，細胞數量多則多加。也可根據預實驗時最終蛋白濃度實際情況調整。

8.置 2-8℃條件振蕩 30-40 分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

3) 此步驟蛋白提取液處理產物中有時會出現少量透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的蛋白復合物。不檢測和基因組 DNA 結合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10 秒間隔 10 秒，超聲 3 分鐘，隨后離心取上清用于后續實驗。檢測一些常見的轉錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時，不必進行超聲處理。

如果引入其他外源性蛋白質不影響下游實驗的話，也可以加入 DNase 處理。

9.在 4℃，12000×g 條件下離心 10 分鐘。

10.將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

11.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

三、組織蛋白提取：

1.提取液制備：

每 500μl 冷的蛋白提取液 A 加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物和 1μl 磷酸酶抑制劑。

每 200μl 冷的蛋白提取液 B 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物和 1μl 磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2.取適量組織樣本用手術jian刀盡可能剪碎，每 20 mg 樣本中加入 200-300μl 冷的提取液 A，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。

3.勻漿液置 2-8℃條件振蕩 10-30 分鐘。

【注】：

1) 提取液 A 處理后細胞體積應減少，否則延長提取液 A 振蕩處理時間。

2) 如果需要同時收集胞質蛋白，可以稍微減少試劑 A 的用量，以提高獲得的胞質蛋白樣品的濃度。

3) 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

4) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

4. 然后在 4℃，2000×g 力條件下離心 5 分鐘。

5. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請置于冰上或-80℃冰箱保存備用。

6. 在沉淀中加入 80-200μl 冷的蛋白提取液 B，高速渦旋振蕩 15 秒。

【注】：

1) 加提取液 B 前，必須盡可能吸干提取液 A。否則會影響核蛋白純度。

2) 也可以用 PBS 將沉淀洗滌一次。PBS 重懸沉淀，12000g 離心 5 分鐘。

3) 提取液 B 用量根據實驗細胞數量情況調整，細胞數量多則多加。也可根據預實驗時最終蛋白濃度實際情況調整。

7. 置 2-8℃條件振蕩 30-40 分鐘，至無明顯沉淀。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

2) 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

3) 此步驟蛋白提取液處理產物中有時會出現少量透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物

為含有基因組 DNA 等的蛋白復合物。不檢測和基因組 DNA 結合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10 秒間隔 10 秒，超聲 3 分鐘，隨后離心取上清用于后續實驗。檢測一些常見的轉錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時，不必進行超聲處理。

如果引入其他外源性蛋白質不影響下游實驗的話，也可以加入 DNase 處理。

8. 在 4℃，12000×g 條件下離心 10 分鐘。

9. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

核蛋白提取試劑盒(無去垢劑）常備現貨

產品訂購信息：

P5072  核蛋白提取試劑盒（無去垢劑）  50T/100T