諾博萊德 酵母膜蛋白提取試劑盒

酵母膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5026

產(chǎn)品名稱：酵母膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：酵母膜蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5026 酵母膜蛋白提取試劑盒

跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。酵母膜蛋白提取試劑盒是一種高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒，酵母膜蛋白提取試劑盒可以從各種酵母樣本中提取膜蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解酵母總膜組份，包括質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：酵母

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。

酵母膜蛋白提取試劑盒是一種高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒，酵母膜蛋白提取試劑盒可以從各種酵母樣本中提取膜蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解酵母總膜組份，包括質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。

本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便。

2. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒、離心管、吸頭、一次性手套。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 預(yù)實(shí)驗(yàn)很重要。必須要做預(yù)實(shí)驗(yàn)，在正式實(shí)驗(yàn)之前取少量樣本優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，并像正式樣本一樣認(rèn)真進(jìn)行，看實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否可行，實(shí)驗(yàn)條件是否適合自己的樣本。由于生物樣本的多樣性，不同樣本的實(shí)驗(yàn)條件通常差異較大，同種細(xì)胞的不同模型下需要的實(shí)驗(yàn)條件也可能不同，為了避免浪費(fèi)正式樣本和試劑，一定要提前預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。

2. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

4. 提取液 B 在使用前須一直置于 2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

5. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

二、操作步驟:

1. 提取液制備：

每 500 μl 酵母蛋白提取液 B 中加入 2 μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 提取液 B 在使用前須一直置于 2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

4) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取適量酵母培養(yǎng)物，在 4℃，2000×g 條件下離心 5-10 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集酵母沉淀。

3. 用冷 PBS 洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 每 100-200 μl 體積酵母沉淀物中加入 500 μl 酵母蛋白提取液 A，混勻后，在室溫或 37℃條件下輕輕振蕩 30 分鐘-1 小時(shí)。

【注】：

1) 若后面步驟中試劑 B 處理時(shí)沉淀難以裂解，應(yīng)延長(zhǎng)此步試劑 A 的處理時(shí)間。

2) 有些酵母樣本細(xì)胞壁較厚，難以破壁，最長(zhǎng)可以將試劑 A 處理時(shí)間延長(zhǎng)至 8 小時(shí)。

5. 在 4℃，2000×g 條件下離心 5-10 分鐘，移除上清，收集沉淀。

6. 在沉淀物中加入 500 μl 冷的（4℃）酵母蛋白提取液 B，混勻。

【注】：

1) 提取液 B 在使用前須一直置于 2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

7. 在 2-8℃條件下輕輕振蕩 15-45 分鐘。

【注】：

1) 必須在 2-8℃條件下處理。

2) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

3) 沒有 2-8℃振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

4) 試劑 B 處理后沉淀應(yīng)明顯減少，否則延長(zhǎng)處理時(shí)間。

5) 若延長(zhǎng)時(shí)間后沉淀仍難以裂解，應(yīng)延長(zhǎng)試劑 A 的處理時(shí)間。

8. 將提取液在 4℃條件下 12000×g 離心 5 分鐘，取上清。

【注】：

1) 此時(shí)酵母膜蛋白已溶解于抽提液 B，酵母菌體沉淀會(huì)減少，若有大量未溶解酵母菌體,請(qǐng)延長(zhǎng)步驟 4 和步驟 7 的振蕩時(shí)間，振蕩中途可用移液器吹打混勻。

9. 將上清在 37℃水浴 10 分鐘。

10. 在 37℃ 1000×g 離心 3 分鐘。

【注】：

1) 此步驟必須在 37℃離心。

2) 無(wú) 37℃條件離心也可不離心，延長(zhǎng) 37℃水浴時(shí)間至液體澄清，分層明顯即可。

11. 此時(shí)溶液分為 2 層，小心移除上層部分，留下管底部下層部分大約 30-50μl 液體。

【注】：

1) 下層為粘稠狀液體。

12. 用 50-100μl 膜蛋白溶解液 C 溶解該下層溶液，即得酵母膜蛋白樣品。

【注】：

1) 膜蛋白比較難溶解，不能很快溶解混勻，可以在加入溶解液后稍微吹打混勻，然后置于 4℃冰箱靜置至溶解。中途用移液器輕輕吹打混勻一次。靜置后取出再次用移液器稍微吹打混勻即可。

2) 于 4℃靜置直至管底透明膠狀物wan全溶解。

13. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理

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