詳情介紹
諾博萊德 脂肪組織蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）-直接濾除液態脂肪
脂肪組織蛋白提取試劑盒 常備現貨
產品貨號：P5096
產品名稱：脂肪組織蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）-直接濾除液態脂肪
產品規格：50T/100T
儲存條件：2-8℃，1 year
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
NobleRyder P5096 脂肪組織蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）-直接濾除液態脂肪
脂肪組織蛋白提取試劑盒適用于從脂肪組織和各種脂肪含量高的實體組織和細胞，如脂肪細胞、脂肪肝細胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結締組織、胸腺組織等動物組織中提取可溶性總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質譜實驗的組份，最后得到的蛋白質樣品經過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質組學相關實驗研究。本產品的蛋白酶抑制劑混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF導致的質譜峰漂移，因此使用本產品提取的蛋白樣品可以用于質譜(MassSpectrometry,MS)檢測和分析，蛋白質組學(proteomics)等相關研究。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。
適用樣本：動物組織
注：
1、蛋白提取液A2、蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2、避免反復凍融。
3、蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
4、試劑拆封后請盡快使用完！
產品簡介：
脂肪組織蛋白提取試劑盒適用于從脂肪組織和各種脂肪含量高的實體組織和細胞，如脂肪細胞、脂肪肝細胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結締組織、胸腺組織等動物組織中提取可溶性總蛋白。提取過程簡單方便，可在 1 小時內完成。
本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。
本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、Triton X-100、chaps 等可能影響質譜實驗的組份，最后得到的蛋白質樣品經過透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質組學相關實驗研究。
本產品的蛋白酶抑制劑混合物中不含 AEBSF，可以避免由于 AEBSF 導致的質譜峰漂移，因此使用本產品提取的蛋白樣品可以用于質譜(Mass Spectrometry,MS)檢測和分析，蛋白質組學(proteomics)等相關研究。
本試劑盒提取的蛋白也可用于 Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。
本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。
本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。
本試劑盒所配蛋白脫脂肪離心柱可以用來濾除蛋白質溶液中的液態脂滴，對蛋白質無吸附。蛋白脫脂柱可以重復利用。
自備試劑和儀器：
離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒、PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒、離心管、吸頭、一次性手套。
產品特點：
1、使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2、提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至 30 分鐘-1 小時。
3、含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
4、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5、總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。
6、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 5種獨立的蛋白酶抑制劑 Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
使用方法：
一、使用注意事項：
1、旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
2、實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
3、蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
4、可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
二、脂肪組織蛋白提取：
1、提取液制備：
根據待處理樣品數量，將試劑 A1 和試劑 A2 按 9：1 混合，配成蛋白提取液 A，充分混勻備用。
每 500μl 蛋白提取液中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
【注】：
（1) 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
（2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
（3) 蛋白樣品用于測定某些細胞內蛋白酶、磷酸酶活性等下游實驗時，注意根據實際情況調整抑制劑混合物是否加入。
（4) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。
2、取 100-200mg 組織樣本剪碎，加入 500μl 蛋白提取液 A，用組織勻漿器/勻漿機充分勻漿。
【注】：
（1) 如果組織樣品很細小，可以剪碎后直接加入提取液振蕩 15-30 分鐘，可以不用勻漿器。
（2) 也可用液氮研磨的方法，常規操作即可。
3、將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中，在 4℃條件下振蕩 15-30 分鐘。
【注】：
（1) 用振蕩器/搖床的較低轉速，保持液體稍微晃動即可。
（2) 沒有振蕩條件可以不振蕩，置 4℃靜置即可，稍微延長時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
4、將振蕩處理過的勻漿液在 4℃，12000×g 條件下離心 15 分鐘，棄沉淀，收集上清。
5、將上清吸入蛋白脫脂離心管內管中，套上液體收集管，在 4℃，10000-12000×g 條件下離
心 10-15 分鐘。
【注】：
（1) 蛋白脫脂離心管可以重復利用，一般一個離心管可以用 5-20 次。
（2) 提取液液面有大量脂肪層時，建議可以先用移液器吸除脂肪層，有利于延長脫脂柱使用壽命，增加使用次數。
（3) 如果內管中液體不容易離心下來時，可以將離心力提高到 16000×g 離心 15 分鐘。
6、將液體收集管中的液體吸入另一干凈離心管，即可得到蛋白樣品。
【注】：
（1）蛋白脫脂離心管內管和外管用 PBS 洗滌后，用于下一個樣品。
7、將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于下游實驗。
【注】：
（1) 蛋白樣品中含有鹽，需要脫鹽處理后用于雙向電泳。
（2) 經透析或脫鹽離心柱處理的蛋白樣品不含有去垢劑和高濃度鹽。
8、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
【注】：
（1) 建議用 BCA 法進行蛋白定量。
（2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。
注意事項：
1、正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。
6、實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理
