諾博萊德 DB3.1 感受態細胞

 DB3.1 感受態細胞   載體構建

產品貨號：C9258

產品名稱：DB3.1 感受態細胞

產品規格：20*100ul/10*100ul

產品簡介：

儲存條件：-70℃

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyderC9258 DB3.1 感受態細胞的大腸桿菌DB3.1細胞含有gyrA462基因，對λ噬菌體的ccdB基因產物的毒性具有抵抗作用，特別適用于轉化和擴增包含ccdB基因的質粒載體。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達107cfu/µg。

基因型:

F-gyrA462endA1Δ(sr1-recA)mcrBmrrhsdS20(rB-,mB-)supE44ara-14galK2lacY1proA2rpsL20(SmR )xyl-5λ-leumtl1

抗生素耐藥性：細胞具有鏈mei素抗性。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1. 取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。

2. 向感受態細胞懸液中加入目的DNA，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置30分鐘。

3. 將離心管置于42℃水浴中放置60秒鐘，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2分鐘，該過程不要搖動離心管。

4. 向每個離心管中加入500μL無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃150rpm，搖床振蕩培養60分鐘，目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應抗生素的LB固體培養基平板上，用無菌的細菌涂布器或玻璃珠將細胞均勻涂開。等平板中的液體wan全吸收后，倒置平板，37℃培養 12-16 小時。

6. 保留剩余的菌液于4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。

注意事項：

1．感受態細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。

2．實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3．轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態細胞體積的十分之一。

4．轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數/鋪板DNA總量。

5．為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失降到*低。

 DB3.1 感受態細胞   載體構建

產品訂購信息

C9258 DB3.1 感受態細胞  20*100ul/10*100ul