諾博萊德 Tuner(DE3)感受態細胞

Tuner(DE3)感受態細胞   載體構建

產品貨號：C9938

產品名稱：Tuner(DE3)感受態細胞

產品規格：10×100μl

產品簡介：

儲存條件：-70℃

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyderC9938 Tuner(DE3)感受態細胞為 LacYZ 突變型 BL21(DE3)菌株。Tuner(DE3)菌株可利用 IPTG 的加入量來精準地控制重組蛋白的表達量，與pET 系列載體聯合使用，可以使得蛋白表達從低表達水平到高表達水平進行有效調控（使用低濃度的IPTG 誘導重組蛋白低水平表達時，目的蛋白可能會具有更好的可溶性和生物活性）。該菌株含有λ噬菌體DE3區，可以表達T7RNA 聚合酶。Tuner(DE3)菌株屬于B菌株，lon 和 ompT 蛋白酶缺陷型。Tuner(DE3)感受態細胞由特殊工藝制成，pUC19 質粒檢測轉化效率達107cfu/μgDNA。

基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-) gal dcmlacY1 (DE3)

菌株抗性：對氨芐青mei素、卡那mei素、氯mei素和四環素敏感。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

（以氨芐青mei素抗性的 pET 質粒為例）

1. 將感受態細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入1-5μL含有1-100ng的質粒DNA 到細胞中，用手指bo打管底，輕輕混勻。

2. 冰水浴中放置30分鐘，不要晃動。

3. 42℃熱擊60秒鐘，不要晃動。

4. 冰水浴中放置2分鐘，不要晃動。

5. 加入500μL的室溫的SOC或LB培養基。

6. 置于37℃搖床中，150-200rpm，復蘇培養60分鐘。

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有氨芐青mei素抗性的LB平板上。待液體吸干后，倒置平板37℃培養12-24 小時。

（平板劃線分離法：復蘇培養結束后，12000rpm 離心30秒鐘，棄掉上清，留100μL左右的液體，用200μL 吸頭輕輕吹打散菌塊， 取10μL重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更大的單克隆菌落）。

注意事項：

1．感受態細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。

2．實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3．轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態細胞體積的十分之一。

4．轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數/鋪板DNA總量。

5．為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失降到*低。

Tuner(DE3)感受態細胞   載體構建

產品訂購信息

C9938 Tuner(DE3)感受態細胞  10×100μl