諾博萊德 鏈霉蛋bai酶E PronaseE

鏈霉蛋bai酶E PronaseE   輔助試劑

產品貨號：P6148

產品名稱：鏈霉蛋bai酶E PronaseE

英文名稱：PronaseE

產品規格：250mg

產品簡介：

儲存條件：2-8℃，有效期1年

外觀(性狀)：白色至淺黃色粉末

酶活/效價：效價以實際標簽為準

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyderP6148 鏈霉蛋bai酶E PronaseE是一種非特異性蛋白水解酶。常用于提取DNA和RAN時蛋白消化；研究蛋白結構；從純化的糖蛋白中獲得糖肽等。

使用說明（以下操作內容來自公開文獻，僅供參考）：

消化蛋白

1. 儲存液制備：溶解于去離子水，配制成5-20mg/mL的PronaseE儲存液，若用于DNA或RNA分離步驟，建議將溶液56℃加熱處理15min，之后37℃孵育1h，此步驟能促使酶發生自消化，以去除DNase和RNase污染。之后將儲存液分成單次用量，-20℃凍存。

2. DNA分離：直接加入DNA制備體系（含有0.5-1%SDS以打破DNA-蛋白相互作用），典型Pronase E 工作濃度范圍250-500μg/mL，于37℃孵育1-4h。【注意：建議工作濃度范圍在250-2000μg/mL，依照具體情況而定】

3.  蛋白水解：溶解約0.2μM蛋白到0.2mL50mM碳酸氫銨緩沖液，pH8.0（或磷酸鹽緩沖液，pH7.0），之后按照1%（w/w）加入PronaseE，于37℃孵育24h。根據情況，有可能需要添加4%（w/w）氨肽酶M，并于37℃再孵育18h。

分離小鼠原代造血干細胞

1. 雄性或雌性小鼠被麻醉，并打開腹腔。

2. 肝臟經門靜脈灌注Hanks緩沖鹽溶液（HBSS），然后灌注PronaseE和膠原酶。

3. 用無菌鑷子輕輕取出肝臟，轉移到無菌培養皿中。將肝包膜分開，輕輕搖晃肝臟以釋放細胞。

4. 將細胞懸浮于含有PronaseE、膠原酶和DNase的溶液中，然后在37℃下消化20min。肝細胞經50g離心3min，兩輪分離。

5. 上清在450g下離心獲得造血干細胞8min，然后用18%尼基丹（Nycodenz）溶液懸浮沉淀，制備12%Nycodenz、8.2%Nycodenz 和Gey's 平yan鹽溶液（GBSS）密度梯度離心。

6. 最終，從8.2%的Nycodenz層中純化細胞，獲得造血干細胞。

注意事項：

1、一旦配成溶液，請分裝保存，避免反復凍融造成的產品失效。

2、 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。

3、為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

鏈霉蛋bai酶E PronaseE   輔助試劑

產品訂購信息

P6148 鏈霉蛋bai酶E PronaseE  250mg