諾博萊德 總蛋白提取試劑盒（蛋白相互作用適用（Pull-down、co-IP等））

總蛋白提取試劑盒(蛋白相互作用)常備現貨

產品貨號：P4953

產品名稱：總蛋白提取試劑盒（蛋白相互作用適用（Pull-down、co-IP等））

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：總蛋白提取試劑盒（蛋白相互作用適用（Pull-down、co-IP等））

規格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P4953 總蛋白提取試劑盒（蛋白相互作用適用（Pull-down、co-IP等））

適用樣本：動物細胞/組織

產品介紹

總蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代培養動物細胞和各種動物實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等動物組織樣品中提取總蛋白。配合其他試劑時，也可以用于植物、細菌、真菌、酵母等樣品的總蛋白提取。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器 膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋 白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Pull-down、IP 等蛋白相互作用研究，也可以用于 WB、蛋白質電泳、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白，下游應用范圍廣，提取液裂解細胞 的能力較溫和，需要根據實際樣本情況優化裂解時間。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒按每個處理樣本 50 mg 細胞/組織計（大約 50 μl 細胞沉淀體積），如果需要處理大量的細胞/組織，將提取液按細胞體積的 1：10 加入細胞沉淀即可。每個 50T 試劑盒大約 可以提取 2.5 g 細胞/組織樣本的總蛋白。根據不同的細胞類型，100 mg 細胞沉淀物（107 個 細胞）的總蛋白質產量大約為 6mg 左右。

使用前請注意：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套。

產品特點：

1. 使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

2. 提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至30min-1h。

3. 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

4. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5. 總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

6. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

操作步驟：

一、使用注意事項

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

10. Western Blot實驗內參可以選用beta-actin、GAPDH、Tubulin。

二、懸浮細胞總蛋白提取

1. 提取液準備：

每500μL冷的總蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物和2μL磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 細胞蛋白提取

(1) 取5×106個細胞，在4℃，2500×g條件下離心5min，小心吸取培養基，盡可能吸干收集細胞。

(2) 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

(3) 每5×106—1×107個細胞（大約50mg細胞/50μL細胞沉淀體積）中加入500μL冷的總蛋白提取液，吹打混勻后，在4℃條件下振蕩20-30min，至細胞充分裂解，無明顯細胞沉淀。

(4) 在4℃，12000×g條件下離心15min。

(5) 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。

(6) 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

三、貼壁細胞總蛋白提取

1. 提取液準備：

每500μL冷的總蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物和2μL磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 細胞蛋白提取

(1) 小心吸取貼壁細胞的培養液。

(2) 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

(3) 加入適量冷的總蛋白提取液，振蕩15-30min，至細胞充分裂解，用細胞刮刀刮一遍，將裂解液吸入另一干凈離心管。

(4) 在4℃，12000×g條件下離心15min。

(5) 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。

(6) 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

四、組織樣本總蛋白提取

1. 提取液準備：

每500μL冷的總蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物和2μL磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 組織蛋白提取

(1) 取50-100mg組織樣本，用PBS洗干凈，然后用手術jian刀盡可能剪碎，加入500μl總蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機勻漿至無明顯肉眼可見固體。

(2) 將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩10-20min。

(3) 在4℃，12000×g條件下離心15min。

(4) 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。

(5) 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實驗完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

總蛋白提取試劑盒(蛋白相互作用)常備現貨

產品訂購信息：

P4953  總蛋白提取試劑盒（蛋白相互作用適用（Pull-down、co-IP等））  50T/100T