諾博萊德 酵母質膜蛋白提取試劑盒

酵母質膜蛋白提取試劑盒 常備現貨

產品貨號：P4968

產品名稱：酵母質膜蛋白提取試劑盒

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：酵母質膜蛋白提取試劑盒

規格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P4968 酵母質膜蛋白提取試劑盒

產品簡介：

跨膜蛋白承擔各種生物功能，膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質譜分析等應用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰。

酵母膜蛋白提取試劑盒是一種高效的高產膜蛋白提取試劑盒，酵母膜蛋白提取試劑盒可以從各種酵母樣本中提取膜蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過程簡單方便。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解酵母總膜組份，包括質膜、核膜和各種細胞器膜。 本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

適用樣本：酵母

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以 2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或 37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產品特點：

1、提取過程簡單方便。

2、含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

3、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或 37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

二、酵母質膜蛋白提取：

1. 提取液制備：

每 500ul 蛋白提取液 B 中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取適量酵母培養物，在 4℃，2000×g 條件下離心 5-10 分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集酵母沉淀。

3. 用冷 PBS 洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 每 100-200ul 體積酵母沉淀物中加入 500ul 酵母質膜蛋白提取液 A，混勻后，在室溫或 37℃條件下輕輕振蕩 30 分鐘-1 小時。

【注】：

1) 若后面步驟中試劑 B 處理時沉淀難以裂解，應延長此步試劑 A 的處理時間。

2) 有些酵母樣本細胞壁較厚，難以破壁，可以將試劑 A 處理時間延長，最長可以將試劑 A 處理時間延長至 8 小時。

5. 在 4℃，2000g 條件下離心 5-10 分鐘，移除上清，收集沉淀。

6. 在沉淀物中加入 500ul 冷的（4℃）酵母質膜蛋白提取液 B，混勻。

7. 在 2-8℃條件下輕輕振蕩 15-45 分鐘。

【注】：

1) 必須在 2-8℃條件下處理。

2) 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

3) 沒有 2-8℃振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

4) 試劑 B 處理后沉淀應減少，否則延長處理時間。

5) 若延長時間后沉淀仍難以裂解，應延長試劑 A 的處理時間。

8. 將提取液在 4℃條件下 12000×g 離心 5 分鐘，取上清。

【注】：

1) 此時酵母膜蛋白已溶解于抽提液 B，酵母菌體沉淀會減少，若有大量未溶解酵母菌體，請延

長步驟 4 和步驟 7 的振蕩時間，振蕩中途可用移液器吹打混勻。

9. 將上清在 37℃水浴 10 分鐘。

10. 在 37℃，1000×g 條件下離心 3 分鐘。

【注】：

1) 此步驟必須在 37℃離心。

2) 無 37℃條件離心也可不離心，延長 37℃水浴時間至液體澄清，分層明顯即可。

11. 此時溶液分為 2 層，小心移除上層部分，留下管底部下層部分大約 30-50ul 液體。

【注】：

1) 下層為粘稠狀液體。

12. 用 50-100ul 膜蛋白溶解液 C 溶解該下層溶液，即得酵母質膜蛋白樣品。

【注】：

1) 膜蛋白如果不能很快溶解混勻，可以在加入溶解液后稍微吹打混勻，然后置于 4℃冰箱靜置10 分鐘。靜置后取出再次用移液器稍微吹打混勻即可。

2) 如果 4℃靜置 10 分鐘后仍未有效混勻，可以稍微延長靜置時間。

13. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

酵母質膜蛋白提取試劑盒 常備現貨

產品訂購信息：

P4968  酵母質膜蛋白提取試劑盒  50T/100T