諾博萊德 植物內質網蛋白提取試劑盒（酶法）

植物內質網蛋白提取試劑盒(酶法)常備現貨

產品貨號：P5017

產品名稱：植物內質網蛋白提取試劑盒（酶法）

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：植物內質網蛋白提取試劑盒（酶法）

規格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P5017 植物內質網蛋白提取試劑盒（酶法）

產品簡介：

植物內質網蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞和各種實體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取內質網蛋白。提取過程簡單方便，制備的內質網蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解植物內質網組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳。

本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的蛋白，回收率相比非酶法稍有提高，蛋白純度高，但是耗時較長。非酶法提取過程簡單方便，速度快，可在1小時內完成，絕少交叉污染，保持天然活性，但是蛋白回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對提取速度和蛋白活性沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請根據實際需要選擇試劑盒。

適用樣本：植物

注：

各組份儲存條件:

蛋白提取液2-8℃保存

蛋白酶抑制劑-20℃保存。

提取液A長期不用請置-20℃保存。

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

自備試劑和儀器

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產品特點：

1、使用方便。

2、含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

3、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷:所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

二、操作步驟

1、提取液準備：

每300ul提取液D中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

注：根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2．取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的200-500mg植物組織樣本用手shu剪刀盡可能剪碎。

注：也可用鋒利的刀片將葉片樣本切成盡可能小的小方塊(1-2mm)。

3．加入500ul 試劑A，充分混勻。

注：可以將葉片組織在液氮中冷凍后稍微搗碎成細的粉末后再加入試劑A. 4．在30℃條件下靜置15分鐘。

5．在2000×g條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

6．在沉淀中加入0.5ml提取液B，充分混勻。

注：培養細胞 1000xg條件下離心5分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞后用PBS洗滌2次，然后直接加入提取液B重懸。

大約每300ul 細胞壓積中加入 1ml提取液B。

根據實際樣本體積調整提取液用量，一般試劑是樣本體積的2-3倍，充分淹沒樣本即可。

7．將提取液B樣本懸液置振蕩器37℃-45℃或室溫振蕩24-72小時。

注：使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

沒有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時用移液器吹打混勻即可。

根據下游核糖體的應用選擇合適的溫度，最高溫度為55℃時制備速度最快。但是溫度過高會影響樣本活性，請根據下游應用選擇溫度。

不同類型的植物樣本需要處理的時間差異較大。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理，年齡小的樣本處理時間短。擬南芥嫩葉最短4小時即可。

部分細胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長時間。可以延長至72小時以上處理以提高得率。

8．在2000×g離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

注：有條件的話最好用100um細胞篩網過濾提取液B處理液后，收集濾液再離心。

沒有細胞篩可以不過濾。

9．在沉淀中加入1000ul 試劑C重懸沉淀，充分混勻。

10．用勻漿機充分勻漿或者用Dounce勻漿器充分勻漿。

注：一般用Dounce勻漿器的勻漿30-40次。

每上下一個來回為一次。

11．將勻漿液置4℃振蕩20-30分鐘。

注：用振蕩器/搖床的較低轉速，保持液體稍微有晃動即可。

沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，在2-8℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

12．在500×g 條件下離心5分鐘，棄沉淀，收集上清。

13．在1000×g 條件下離心10分鐘，棄沉淀，收集上清。

14．將上清20000×g 離心10分鐘。棄沉淀，取上清。

15．將上清30000-50000×g 離心45分鐘。棄上清，留沉淀。

注：如果條件允許，可將離心力加大到100000×g，有利于回收內質網小泡。

16．在沉淀中加入100-300ul提取液D，充分混勻。

17．置振蕩器2-8℃振蕩30分鐘。

注：用振蕩器/搖床的較低轉速，保持液體有輕微晃動即可。

沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，在2-8℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

18．在 4℃，12000×g 條件下離心15分鐘。

19.將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到內質網蛋白。

20.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

注：建議用BCA法進行蛋白定量。

蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

植物內質網蛋白提取試劑盒(酶法)常備現貨

產品訂購信息：

P5017  植物內質網蛋白提取試劑盒（酶法）  50T/100T