諾博萊德 膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）

膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗）常備現貨

產品貨號：P5087

產品名稱：膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）

規格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P5087 膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）

動物跨膜蛋白承擔各種生物功能，在疾病的發生、發展過程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質譜分析等應用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰。膜蛋白提取試劑盒是一種快速高效的高產膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從動物細胞和動物組織提取總膜蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質譜實驗的組份，基本可以滿足下游任意的蛋白質組學相關實驗研究。本產品的蛋白酶抑制劑混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF導致的質譜峰漂移，因此使用本產品提取的蛋白樣品可以用于質譜(MassSpectrometry,MS)檢測和分析，蛋白質組學(proteomics)等相關研究。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

適用樣本：動物細胞/組織

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑G為飽和溶液，有微量絮狀物不影響使用，可在37℃短時間水浴，離心取上清使用或直接離心取上清使用。

4. 試劑拆封后請盡快使用完！

產品簡介：

動物跨膜蛋白承擔各種生物功能，在疾病的發生、發展過程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質譜分析等應用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰。

膜蛋白提取試劑盒是一種快速高效的高產膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從動物細胞和動物組織提取總膜蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、Triton X-100、chaps等可能影響質譜實驗的組份，基本可以滿足下游任意的蛋白質組學相關實驗研 究。本產品的蛋白酶抑制劑混合物中不含 AEBSF，可以避免由于AEBSF導致的質譜峰漂移， 因此使用本產品提取的蛋白樣品可以用于質譜(Mass Spectrometry, MS)檢測和分析，蛋白質組學(proteomics)等相關研究。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產品特點：

1、使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

2、含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

3、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 提取液A在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時會導致不容易分層。

7. 膜蛋白電泳時loading buffer應該避免煮沸。

8. 膜蛋白電泳時可以提高 loading buffer的SDS含量。

9. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

10. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

二、細胞膜蛋白提取：

1. 提取液制備：

每 500μl 冷的蛋白提取液 A 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每 500μl 膜蛋白溶解液 C 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取 5-10×10⁶ 個以上細胞，在 4℃，500g 條件下離心 3-5 分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。

3. 用冷 PBS 洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 細胞樣品中加入 400μl 冷的試劑 A，充分混勻。

5. 在 2-8℃條件下振蕩 20-30 分鐘，至細胞充分裂解，細胞沉淀明顯減少。

6. 在 4℃，12000×g 條件下離心 5 分鐘。

7. 將上清吸入另一干凈離心管，在 37℃水浴 10 分鐘。

8. 在 37℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘，此時溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為 50μl。

9. 小心移除上層液體，收集上層部分留作備用分析。

10. 用 850μl 冷的試劑 C 膜蛋白溶解液溶解下層膜蛋白部分，即得膜蛋白粗提液。

11. 在 900μl 膜蛋白粗提液樣本中加入 100μl 試劑 E，充分混勻。

12. 冰浴或 4℃冰箱靜置 30 分鐘以上。

13. 在 4℃，15000×g 以上條件下離心 15 分鐘。

14. 小心移除上層清液丟棄，留沉淀。

15. 將離心管倒置在吸水紙上干燥離心管。

16. 加入 200μl 試劑 F 到離心管中。

17. 在 4℃，15000×g 以上條件下離心 15 分鐘。棄上清，留沉淀。

18. 將離心管倒置在吸水紙上干燥離心管。

19. 用 40-100μl 試劑 G 溶解蛋白沉淀，充分混勻。

20. 在 4℃，10000×g 條件下離心 10 分鐘。

21. 收集上清用于下游實驗。

22. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于下游實驗。

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗）常備現貨

產品訂購信息：

P5087  膜蛋白提取試劑盒（蛋白組實驗、質譜適用）  50T/100T