諾博萊德 植物細胞核提取試劑盒-酶法

植物細胞核提取試劑盒-酶法 蛋白提取

產(chǎn)品貨號：P5123

產(chǎn)品名稱：植物細胞核提取試劑盒-酶法

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：植物細胞核提取試劑盒-酶法

規(guī)格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder P5123 植物細胞核提取試劑盒-酶法

適用樣本：植物

注：

1. 試劑盒2-8℃保存，開蓋后組份按要求條件保存。

2. 一個月以上長期不用-20℃保存。避免反復凍融。多次凍融會導致失效。

3. 需要長期保存時可以根據(jù)使用情況進行小量分裝后-20℃保存。

4. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

植物細胞核提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞和各種實體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取細胞核。提取過程簡單方便。制備的核不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒提取得到的細胞核可以直接用于蛋白提取等下游應用。

本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的植物核，回收率提高，純度高，保持天然活性，但是耗時較長。非酶法的提取試劑盒提取過程簡單方便，速度快，可在1 小時內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請根據(jù)實際需要選擇試劑盒。

產(chǎn)品特點：

1. 使用方便。

2. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

4. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含5 種獨立的蛋白酶抑制劑 Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、渦旋混勻器、勻漿器/勻漿機、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、離心管、吸頭、細胞篩（100um）、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項：

1、旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2、實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3、可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑。

二、操作步驟：

1、取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的200-400mg植物組織樣本用手術qian刀盡可能剪碎，加1-2ml

PBS后用勻漿機充分勻漿或者加適量PBS后用勻漿機/勻漿器充分勻漿。

2、將勻漿液用100μm細胞篩過濾。

【注】：

①沒有細胞篩的話，在4℃，稍微靜置，讓粗纖維，成團組織塊等沉降，或者以低于100×g條件下離心1分鐘，收集上部液體，棄組織沉淀。

②含黏液較多的樣品可能難以吸取，可以將1ml吸頭尖稍微剪掉一點使用。

3、在濾液在2000×g條件下離心5-10分鐘，收集沉淀。

4、在沉淀中加入500μl提取液A，充分混勻。

【注】：

①培養(yǎng)細胞 1000×g條件下離心5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞后用PBS洗滌2次，然后直接加入提取液A 重懸。

②大約每300μl細胞壓積中加入1ml提取液A。

③一般加入樣本體積的2-3倍體積的提取液A，充分淹沒樣本即可。

5、將細胞懸液置振蕩器上37℃或室溫振蕩12-72小時。

【注】：

①使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。沒有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時用移液器吹打混勻即可。

②不同類型的植物樣本需要處理的時間差異較大。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理，年齡小的樣本處理時間短。擬南芥嫩葉最短4小時即可。

③部分細胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長時間。可以延長至72小時以上處理以提高核得率。

6、在2000×g條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

7、在沉淀中加入500μl-1ml提取液B，用勻漿器充分勻漿，在勻漿液中補充提取液B至1ml，充分混勻。

8、置振蕩器振蕩5-10分鐘。

【注】：

①使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。

②沒有振蕩條件也可以不振蕩，置4℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾小時用移液器吹打混勻即可。

9、在2000×g條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀，即為細胞核。

10、用細胞核保存液C或者其它相應的緩沖液重懸細胞核，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

【注】：

①可以不用試劑C。

②根據(jù)下游實驗需要選擇重懸液。

③保存液中的細胞核可以2000×g條件下離心10分鐘重新回收。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得優(yōu)良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

植物細胞核提取試劑盒-酶法 蛋白提取

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P5123  植物細胞核提取試劑盒-酶法  50T/100T