諾博萊德 ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)，ATPase Stain Kit(Calcium-Cobalt Method)

ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)   酶類染色

產品貨號：G0168

產品名稱：ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)，ATPase Stain Kit(Calcium-Cobalt Method)

產品規格：5*50ml

產品簡介：

中文名稱：ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)

英文名稱：ATPase Stain Kit(Calcium-Cobalt Method)

規格：5*50ml

儲存條件：2-8℃，避光保存，有效期6個月。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder G0168 ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)，ATPase Stain Kit(Calcium-Cobalt Method)產品介紹

三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，ATPase)是一種水解酶，是催化ATP合成的一種酶。三磷酸腺苷酶根據所用激活劑、抑制劑以及酶定位的不同分為膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、線粒體三磷酸腺苷酶等。ATPase能水解三磷酸腺苷為磷酸腺苷和磷酸，此酶只作用于磷酸與磷酸之間的高能鍵，因而釋放大量能量。其催化反應如下： A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量。

 三磷酸腺苷酶染色試劑盒(鈣鈷法)原理在于肌球三磷酸腺苷酶（mATPase）水解三磷酸腺苷為二磷腺苷和磷酸的反應具有pH依賴性，進而利用不同pH對mATPase活性的影響來進行肌纖維分型染色區分。

自備材料：

1%氯化鈣溶液

操作步驟：(僅供參考)

本試劑盒不建議使用固定后樣本染色。如需固定或脫水不可使用含乙醇、甲醇或丙酮以及磷酸鹽成分輔助試劑。染色結果如需長期儲存可在顯色還原前使用水基固定液固定。

切片預處理

1. 冰凍切片滴加少許37℃預熱的酸/堿預孵育液覆蓋組織復溫1min。（具體酸堿孵育液選擇同步驟2）

2. 一張切片滴加堿性預孵育液孵育15min，傾去多余液體。另一張切片入酸性預孵育液孵育5min，稍傾去后滴加堿性預孵育液孵育30s，傾去多余液體。

染色步驟

3. 孵育過程中按照1：49的比例混勻底物儲備液和染色緩沖液制備ATPase染色工作液，置于37℃預熱， 即配即用。用量根據組織大小分配100-200ul/組織切片即可。

4. 預孵育后的切片滴加預熱的ATPase染色工作液，37℃孵育30-45min。

5. 1%氯化鈣處理3次，每次1min，每次處理后傾去多余液體，不可大力沖洗。

6. 滴加適量Co溶液覆蓋切片3min，蒸餾水浸洗4次每次3min。

7. 在上述過程中配制顯色工作液，即取適量試劑(E)在通風櫥內用蒸餾水稀釋50倍，即為顯色工作液， 即配即用。切片入顯色工作液孵育1-2min至切片呈均勻黑褐色。流水洗10min或蒸餾水浸洗4次每 次3min。

8. 切片傾去多余水分后使用預熱融化的甘油明膠封片劑封片后光學顯微鏡觀察。

注意事項：

1. 切片入ATPase染色工作液前后不可用水沖洗。

2. 若要鑒別肌纖維所屬類型，最好用連續冰凍切片，同時注意避免切片在孵育和染色過程中干燥變形。

3. 配好的ATPase底物儲備液易失效，建議配好后分裝成小份置于-20℃保存，可保存至少1年。2-8℃冰箱可保存至少1月，室溫放置建議3天內使用完畢，不建議反復凍融。配好的ATPase染色工作液隨著溶液中沉淀量增加而逐漸失效，配置容器底部觀察到明顯白色沉淀時不可使用，預熱充分后建議在4-6 小時內使用完畢。

4. 顯色液具有腐蝕性和刺激性氣味，應在通風櫥內小心操作。顯色液易被氧化失效，2-8℃密閉可保存至少6個月，溶液變無色或出現黑色沉淀時不可使用。稀釋后的顯色工作液隨時間推移顏色會逐漸變淺，建議在2小時內使用完畢。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)   酶類染色

產品訂購信息：

NobleRyder G0168 ATPase染色試劑盒(鈣鈷法)，ATPase Stain Kit(Calcium-Cobalt Method) 5*50ml