諾博萊德 金擔子素A（AbA），Aureobasidin A，AbA

金擔子素A（AbA）   輔助試劑

產品貨號：A6868

產品名稱：金擔子素A（AbA），Aureobasidin A，AbA

產品規格：1mg

產品簡介：                          

別名：AbA

英文名稱：Aureobasidin A

分子式：C₆₀H₉₂N₈O₁₁

分子量：1100

儲存條件：2-8℃，有效期2年

規格：1mg

外觀(性狀)：白色凍干粉

純度：≥95%

溶解性：0.5mg/mL 無水乙醇

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder A6868 金擔子素A（AbA），Aureobasidin A，AbA

產品介紹          

金擔子素A（Aureobasidin A，AbA）是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環酯肽類抗生素，具有很強的抗真菌能力。在較低的濃度下（0.1-0.5 μg/ml）即可對酵母產生毒性。對其敏感的真菌種類包括：出牙酵母（Saccharomyces cerevisiae）、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、構巢曲霉（Aspergillus nidulans）和黑曲霉（A. niger.）。作用機制在于AbA抑制了真菌生長所依賴的肌醇磷酰胺（inositol phosphorylceramide，IPC）合成酶的活性，干擾鞘脂合成，從而進一步殺死菌株。編碼IPC合成酶的基因研究較多的有來自釀酒酵母菌的AUR1 基因，以及構巢曲霉的AURA基因，兩者具有同源性。通過對這些編碼基因進行突變即可使得菌株對AbA產生抗性，如AUR1-C基因。

AbA非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標記。AbA抗性也是酵母單/雙雜交研究中理想的報告子。

操作步驟（抗AbA的酵母轉化系統）

1）加入0.5 ml過夜培養的酵母到50 ml YPD培養基中（配方：1L液體培養基含有10g yeast extract，20g polypeptone， 20g D-glucose；固體培養基另外加入2%瓊脂；）。

2）30℃培養約6小時，測定OD660為1～2。使用二倍體時，測定OD660為2～4。

3）1,000×g離心5分鐘。

4）用10 ml Solution A（配方：100 mM Lithium acetate，10 mM Tris-HCl pH 7.5，1 mM EDTA）懸浮沉淀，1,000×g離心5分鐘。

5）用Solution A重懸沉淀，直到OD660為150。

6）在管內分取100 µl細胞懸浮液，30℃培養1小時。

7）加入5 μg載體（環狀或線性DNA）和150 μg Carrier DNA（已經過100℃加熱10分鐘，并迅速冷卻）。

【注】：pAUR101需使用線性DNA進行轉化。使用環狀DNA會降低轉化效率甚至轉化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的質粒DNA進行轉化。

8）加入850 µl Solution B（配方：取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解，需要現用現配），輕輕混勻。

9）30℃培養30分鐘后，42℃培養15分鐘。

10）室溫放置10分鐘。

11）5,000 rpm離心1分鐘，用5 ml YPD培養基懸浮沉淀。

12）30℃培養6小時~過夜。

13）5,000~10,000 rpm離心，用1-10 ml 0.9% NaCl懸浮沉淀。

14）在YPD選擇培養基平板（含有一定濃度的AbA，依菌株類型而定）上接種100 µl細胞懸液。30℃培養3-4天后轉化完成。

15）挑取陽性轉化子，和/或測定轉化效率（以每微克質粒DNA轉化的菌落數來表示）。

 備注：產品信息可能會有優化升級。請以實際標簽信息為準。

金擔子素A（AbA）   輔助試劑

產品訂購信息：

NobleRyder A6868 金擔子素A（AbA），Aureobasidin A，AbA 1mg