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超氧陰離子清除能力試劑盒說明書
微量法 100T/96S
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質、蛋白質、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細胞結構和功能的破壞，與機體衰老和病變有很密切的關系，清除超氧陰離子自由基的研究已經得到了廣泛的關注。
測定原理：
AP-TEMED 系統產生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應生成 NO2－，NO2－與對氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物，在 530nm 處有特征吸收峰，樣品對超氧陰離子的清除能力與 530nm 的吸光值呈負相關。
超氧陰離子清除能力試劑盒 抗氧系列
組成：
產品名稱 | BD6016-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 1.5ml | 4℃避光 |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | 4℃避光 |
試劑三：液體 | 7.5ml | 4℃ |
試劑四：液體 | 7.5ml | 4℃避光 |
試劑五：液體 | 7.5ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 | |
自備儀器和用品：
天平、研缽、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。
樣品處理：
1. 組織：按照質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清置于冰上待測。
2. 細胞：按照細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 4℃，10000g離心 10min，取上清置于冰上待測。
3. 培養液或其它液體：直接檢測。
粉劑藥物可配制成相同濃度，比如 1mg/ml
測定操作表：
對照管 | 測定管 | |
試劑一（μl） | 10 | 10 |
試劑二（μl） | 40 | 40 |
H2O（μl） | 25 | |
充分混勻，25℃反應 1min | ||
樣品（μl） | 25 | |
試劑三（μl） | 50 | 50 |
充分混勻，37℃反應 30min | ||
試劑四（μl） | 50 | 50 |
試劑五（μl） | 50 | 50 |
充分混勻，37℃顯色 20min，于微量石英比色皿/96 孔板，在 530nm 處測定對照管和測定管的吸光值，分別記為A 對照管和A 測定管。 | ||
注意：對照管只需測定一次。
計算公式:
超氧陰離子清除率 I%= A對照管- A測定管′100%
A對照管
注意事項：
1. 試劑一 4℃可保存 2 個月，配制好的試劑二 4℃可保存一周，建議實驗前配制，并盡快使用。
2. 樣品處理完后立即進行測定，或者低溫保存不超過 24 小時。
超氧陰離子清除能力試劑盒 抗氧系列
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