乙醛脫氫酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）試劑盒說明書

微量法100T/96S

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

乙醛脫氫酶 (EC 1.2.1.10)是醛脫氫酶的一種，廣泛存在于各種動物、植物和微生物體內。主要作用是將乙醛氧化成乙酸，在酒精代謝中起主要作用。在人類和許多動物體內，線粒體乙醛脫氫酶能把對生物體有害的醇類轉化，所以在細胞解毒研究中乙醛脫氫酶受到高度關注；同時，乙醛脫氫酶在分子生物學以及相關疾病的檢測方面有較廣泛的研究應用。

測定原理：

在輔酶Ⅰ存在的條件下，乙醛脫氫酶催化乙醛和 NAD+轉化為乙酸和NADH，在 340nm 處的吸光值會增加，測定 340nm 處的吸光值變化，可計算得到乙醛脫氫酶的活性。

組成：

自備儀器和用品：

天平、離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。

ALDH 提取:

1、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 20min。

2、細胞：按照細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3、液體：直接檢測。

測定操作表:

1、分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長至 340nm。

2、操作表

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按蛋白濃度計算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/mg prot）=

（2）按樣本質量計算

DA ×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T = 804×△A÷Cpre′ d酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/g 鮮重）=

（3）按照細胞數量計算

DA ×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T= 804×△A÷We′ d酶活定義：每 104 個細胞每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/104cell）=數量（萬個）

（4）按液體體積計算

DA ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細胞數量（萬個））÷T= 804×△A÷細胞e′ d酶活定義：每ml 樣本每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/ml）=DA ×V 反總÷V 樣÷T= 804×△A e′ de：NADH 微摩爾消光系數，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應體系總體積，0.2ml； V 樣：反應體系中樣本體積，0.04ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，gb. 用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按蛋白濃度計算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/mg prot）=

（2）按樣本質量計算

DA ×V 反總÷（V 樣×Crp）÷T = 1608×△A÷Cpre′ d酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/g 鮮重）=

（3）按照細胞數量計算

DA ×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T = 1608×△A÷W e′ d酶活定義：每 104 個細胞每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/104cell）=胞數量

（4）按液體體積計算

DA ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細胞數量（萬個））÷T= 1608×△A÷細e′ d酶活定義：每ml 樣本每分鐘催化還原 1nmol NAD+的酶量為 1 個酶活單位。ALDH 酶活（nmol/min/ml）=DA ×V 反總÷V 樣÷T= 1608×△A e′ de：NADH 微摩爾消光系數，6.22×10-3 L/µmol/cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 反總：反應體系總體積， 0.2ml；V 樣：反應體系中樣本體積，0.04ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml； W：樣本質量，g