β-1,3 葡聚糖酶（β-1,3-glucanase，β-1,3-GA）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下，可誘導細胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性測定廣泛應用于植物病理和逆境生理研究。

測定原理：

β-1,3-GA 水解昆布多糖，內切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產生還原末端，通過測定還原糖生成速率來計算其酶活性。

β-1,3葡聚糖酶試劑盒 糖代謝系列-常備現貨

組成：

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 3ml 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；12000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 550nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定（在 1.5ml EP 管中依次加入下列試劑）：

充分混勻，放入 37℃水浴 60 min

充分混勻，95℃水浴 5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻，550nm 處記錄各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸餾水稀釋后測定（計算公式乘以相應稀釋倍數），ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需設一個對照管。

β-1,3-GA 活性計算：

1、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0958x -0.0192；x 為標準品濃度（mg/ml），y 為吸光值。

2、血清（漿）β-1,3-GA 活力的計算

β-1,3-GA(mg/h/ml)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷V1=10.438×(ΔA +0.0192)

3、細胞、細菌和組織中β-1,3-GA 活力的計算

（1） 按蛋白濃度計算

單位的定義：每mg 組織蛋白每小時產生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h/mg prot)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義：每g 組織每小時產生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h /g 鮮重)=[( ΔA +0.0192)÷0.09585×V1]÷(W×V1÷V2)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每小時產生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h /10⁴ cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0208×(ΔA+0.0192)

V1：加入反應體系中樣本體積，0.1ml；V2：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

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