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動物組織/細胞/昆蟲總 RNA 提取試劑盒
動物組織/細胞/昆蟲總RNA快速提取試劑盒
目錄號：91017
產品內容
產品成份 | 91017-50（50 次） |
裂解液 ARL | 50 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入zhi定量無水乙chun） |
70%乙chun | 9 ml（需加入zhi定量無水乙chun） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5 ml 離心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0 ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自備試劑
無水乙chun
保存條件
室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個月，不影響使用效果。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
產品簡介
適用于快速提取各種動物組織、細胞、昆蟲的總RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉錄組測序、RACE等。
產品特點
1. 無毒：免lv仿、免β-巰基乙chun！
2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
3. 高效：提取全過程僅需 20min！
操作步驟
提示：
第一次使用前，請先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入zhi定量無水乙醇。
所有離心步驟均需要在室溫（15 ~37℃）下進行。
1. 動物組織、昆蟲
a. 電動勻漿：取新鮮組織 10~20 mg 加入 350 μl 的裂解液 ARL，電動勻漿，直到無明顯組織塊即可。
b. 液氮研磨：轉移 350 μl 裂解液 ARL 至 1.5 ml 離心管中。液氮研磨組織成細粉，取 10~20 mg 組織細粉轉入裝有裂解液的 1.5ml 離心管中，劇烈渦旋振蕩，充分裂解。
( 注意：裂解 20-30 mg 動物組織，需要加入 600μl 裂解液 ARL )
c. 將勻漿后裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，轉移上清至新的離心管中。
d. 下接步驟 3。
2. 細胞
a. 懸浮細胞：離心收集細胞，加350μl裂解液ARL（<5x106 細胞）或600μl裂解液ARL（5x106-1x107 細胞），吹打混勻，劇烈渦旋振蕩，充分混勻，裂解細胞。
b. 貼壁細胞：不需要消化，che底吸干培養液后，直接加裂解液 ARL，反復吹打細胞，幫助裂解；細胞培養瓶要先用胰蛋白mei消化后離心收集細胞，然后加入裂解液 ARL，吹打混勻，劇烈渦旋振蕩 20 sec，充分裂解。
（< 5x106細胞加 350 μl裂解液 ARL ；5x106-1x107細胞加 600 μl 裂解液 ARL）
（一般情況下，24 孔板、6 孔板、直徑 3.5cm 的培養皿，每孔加 350 μl
裂解液 ARL，直徑 6cm 以上的培養容器加 600 μl 裂解液 ARL）
c. 下接步驟 3。
3. 向上清或者裂解物中加入等體積（通常為 350 μl / 600 μl）的 70%乙醇，
吹打混勻。
4. 每次轉移≤700 μl 混合物至一個 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），
13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液，此時 RNA 被吸附在膜上。重復此
過程，直到溶液全部上柱。
5. 加入700μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 30 sec，
倒棄濾液。
6.加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 離心30sec，倒棄濾液。
7. 重復步驟 6。
8. 將 RNA 吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上乙醇。
9. 取出RNA吸附柱，放入一個新的 1.5 ml RNase - free 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加30~50 μl RNase free H2O（事先在70-90℃水浴中加熱可提高產量），室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。
10.提取的RNA可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。
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附錄：
一、免液氮直接研磨（自動研磨儀）——適用于新鮮樣本
a. 在2.0 ml液氮研磨管中加入4 mm兩粒，加600μl裂解液ARL，放進20mg 左右的樣本，設置65個頻率，震蕩2min。
b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。
二、液氮研磨（自動研磨儀）:
a. 把研磨模塊丟到液氮中預冷，直到沒有氣泡冒出視為預冷完畢。
b. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3mm 鋼珠 3 粒，放進 20-30mg 樣本，
投入液氮中預冷。
c. 把預冷好的離心管插入研磨模塊中，放進研磨儀，設置 55 個頻率，
震蕩 30~60 sec。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）
d. 研磨完成后，馬上加 600 μl 裂解液 ARL，劇烈渦旋振蕩,充分混勻。
e. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。
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