多糖多酚植物總 RNA 提取試劑盒（gDNA 過濾器）

Polysaccharide/polyphenol Plant Total RNA Mini Kit

多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒

目錄號：91318

產品內容

自備試劑

無水乙chun

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個月，不影響使用效果。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

適用于快速提取各種植物根、莖、葉、花的總RNA，采用gDNA過濾器，高效濾除gDNA，得到的總RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉錄組測序、RACE等。

成功案例：棉花、海棠、黑加侖、煙草、擬南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季花雌蕊、薔薇、沙棘、冬棗、蘆薈、仙人掌、報春花、水稻、玉米、唐菖蒲、櫻桃、白玉蘭、毛白楊、櫻花、葡萄、百合花、百合葉子雌蕊雄蕊、紫菜、綠藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、蘋果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苧麻、慈姑、葛根、甘肅桃、玫瑰花、檳榔果、甜糖菊、硅藻、牡丹、胡楊、油桐果、梨子皮、板栗花序、青皮云杉、紅樹根、鐵線蕨、黃瓜、小麥、番木瓜、甘薯、紫薯、油松、油茶、馬尾松、蕪菁、毛果楊、木薯、大葉落地生根、山杏、旱柳、桉樹、琵琶花果、麻風樹，沙生槐、蕎麥...

產品特點

1. 無毒：免lv仿、免β-巰基乙chun！

2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全過程僅需 20min！

操作步驟

第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入zhi定量無水乙chun，詳見瓶身的標簽。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15 ~37℃）下進行。

1. 材料處理：

a．吸取 500 μl 裂解液 PRL，轉入 1.5 ml 離心管中，再加入50 μl糖酚去除劑PAD，混勻備用。

注意：糖酚去除劑 PAD 是提取多糖、多酚、次級代謝產物多、色素含量豐富的困難樣品bu可或缺的成分。對于幼嫩的農作物葉片等簡單樣本，不加糖酚去除劑 PAD，RNA 的產量可能會提高一些。

b．液氮中研磨植物組織成細粉，取≤50 mg 細粉轉入上述裝有 PRL 裂解液的離心管中, 劇烈渦旋震蕩 30 sec，充分混勻。

冬天氣溫低， 37℃搖床放置 3 min，可增強裂解效果，提高產量

c．將裂解物 13,000 rpm 離心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

注意：使用 1ml 裂解液 PRL 和 100 μl 糖酚去除劑去裂解 100 mg 樣品，RNA 產量會翻倍。

2. 小心吸取上清（一般 480 μl，注意不要吸到沉淀）轉入一個新的 1.5 ml離心管，加入0.5倍體積（一般 240 μl）的無水乙chun, 吹打混勻。

3. 每次轉移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 過濾器中，13,000 rpm 離心2 min，倒棄濾液。此時，絕大部分gDNA 被濾除，RNA 和少量 gDNA殘留被吸附在膜上，重復此過程，直到混合液全部轉入gDNA 過濾器。

4. 取出步驟3的gDNA 過濾器，放入一個新的 2 ml 離心管中，加入 500μl裂解液 PRL Plus，13,000 rpm 離心1 min，收集濾液（RNA 在濾液中），向濾液中加入 250μl 無水乙chun，吹打混勻。

5. 將濾液混合物加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 2 min，此時，RNA被吸附在膜上，倒棄濾液。

6. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

7. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

8. 重復步驟 7。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙chun。

10. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加30~50μl的RNase-free H₂O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

11. 提取的總RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。

附錄：

一、液氮研磨（自動研磨儀）:

a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3 mm 鋼珠 3 粒，放進≤50 mg 樣本，投入液氮中預冷。把研磨模塊也丟到液氮中預冷，直到沒有氣泡冒出視為預冷完畢。

b. 把預冷好的離心管插入研磨模塊中，放進研磨儀，設置 55 個頻率，震蕩 30~60 sec。（以北京赫得京 N9548 為例）

c. 研磨完成后，馬上加 500μl 裂解液 PRL 和 50 μl 糖分去除劑 PAD，劇烈渦旋30 sec。

d. 將裂解物13,000 rpm 離心5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

二、免液氮直接研磨（自動研磨儀）——適用于新鮮樣本

a. 在2.0 ml液氮研磨管中加入5 mm 鋼珠1粒，加1ml裂解液 PRL和100μl PAD，放進≤100 mg 樣本，設置 60 個頻率，震蕩 2 min。

b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

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