FlashPure Blood Total RNA Mini Kit

血液總 RNA 提取試劑盒（離心柱型）

全血RNA快速提取試劑盒 (免lv仿)

目錄號：91016

產品內容

自備試劑

無水乙chun、β-巰基乙chun

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個月，不影響使用效果。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

適用于快速提取新鮮血液的總RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT qPCR，普通轉錄組測序、RACE等。

產品特點

1. 高效：提取全過程僅需 20 min！

2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

操作步驟

提示：所有離心步驟均需要在室溫（15 ~37℃）下進行。

① 第一次使用前，請先在漂洗液 RW 和 70%乙chun中加入zhi定量無水乙chun。

② 操作前，用 RNase-Free H2O 將 10X 紅細胞裂解液 RLB 稀釋到 1X。

③ 操作前，在裂解液 RLT 中加入 β-巰基乙chun至終濃度 1%，如 1ml RLT中加入 10μl β-巰基乙chun。此裂解液最好現用現配。配好的 RLT 4℃可放置一個月。

1. 在適合大小的 RNase free 離心管中加入 1 體積（<1.5 ml）加入各種抗凝劑新鮮血液 (顛倒混勻后)和 3 體積的紅細胞裂解液 RLB，顛倒混勻，可輕彈管壁,確保混勻。

2. 室溫放置 10 分鐘（期間應該顛倒輕彈混勻數次幫助裂解紅細胞）。

注意：如果 RNA 降解嚴重，可在冰上裂解，時間可以長一些以充分裂解。

3. 12,000 rpm 離心 20 秒，倒棄紅色上清，并小心的盡可能多的吸棄上清

（注意不要吸到管底的細胞團），留下完整的管底白細胞團。

注意：離心后在管底應該見到白色的白細胞團，也可能有一些紅細胞殘片和白細胞團在 一起，但是如果看到的是大部分的紅色細胞團，說明紅細胞裂解很不充分，應該再加入紅細胞裂解液，重懸后重復步驟 2，3。

注意：上清盡可能的吸棄，殘留過多會稀釋裂解液，造成裂解結合異常，產量純度降低。

4. 渦旋或者輕彈管壁將白細胞沉淀wan全松散重懸，加入 350 μl（< 0.5 ml全血）或者 600 μl（0.5~1.5ml 全血）裂解液 RLT，吹打混勻后用手劇烈振蕩 20 秒，充分裂解。

注意：病人正常血樣白細胞數量為 4000-7000/μl，如果血樣中白細胞數量可能大幅增加，應該適當減少處理量。或者按照 350 μ（l < 2x106 白細胞）或者 600 μl（2x106~1x107白細胞）的比例加裂解液 RLT。

5. 用吸頭吹打混勻幫助裂解，或者劇烈渦旋震蕩，直到得到滿意勻漿結果。(或者電動勻漿30秒)，可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高產量。

6. 向裂解物中加入等體積（一般 350 μl / 600 μl）的 70%乙chun，吹打混勻。

7. 每次轉移≤700 μl 混合物至一個 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min，RNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。重復此過程，直到溶液全部上柱。

8. 加 700 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

9. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

10. 重復步驟 9。

11. 將 RNA 吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上乙chun。

12. 取出 RNA 吸附柱，放入一個新的 RNase - free1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加 30-50 μl RNase free H2O（事先在 70-90℃水浴中加熱可提高產量）， 室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

13. 提取的 RNA 可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。

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