諾博萊德 Blood miRNA Mini Kit

全血（液體樣本）microRNA 快速提取試劑盒

全血（液體樣本）microRNA快速提取試劑盒

目錄號(hào)：91214

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無(wú)水乙chun

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit 不能有效吸附回收 miRNA，Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA（生物通上有專題文章闡述）。

裂解液 RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是濃縮型的 Trizol )，配合 miRNA 專用的溶液體系，專用于快速提取全血、血漿、血清、腦脊液、尿液等液體樣本的 miRNA 和其它各種小 RNA(15-30 nt )。

Blood miRNA Mini Kit 可以提出來(lái)包含 miRNA 的總 RNA，用于miRNA 的 RT、qPCR 檢測(cè)，以及全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等；根據(jù)需要，也可以一次性把 miRNA 和總 RNA（mRNA、tRNA、rRNA）分別提出來(lái)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 本公司生產(chǎn)的 Blood miRNA mini Kit 質(zhì)量?jī)?yōu)異，可以媲美進(jìn)口品牌。

2. 本品可在常溫下提取 RNA，不需要 4℃離心機(jī)；亦可以兼容 4℃離心機(jī)。

注意事項(xiàng)

1. Wash Solution 2/3 可能加入乙chun使用幾天后，可能會(huì)出現(xiàn)沉淀晶體，并不影響使用，取其上清直接使用就可以。

2. 血液 RNA 的常溫保存/運(yùn)輸/提取的簡(jiǎn)易方案：

臨床取樣：在臨床上，使用抗凝管采血后，取 250 μl 新鮮血液，加入 750μl 的裂解液 RLS ( RNAzol LS Reagent，Cat#R012-100)，用移液槍反復(fù)抽打并振蕩混勻，在室溫裂解 5~10 min，直至血細(xì)胞充分發(fā)生裂解。

保存：經(jīng)裂解后的血液可在-20℃下保存 1-2 個(gè)月，在-70℃保存半年。

運(yùn)輸：可冰袋 4℃運(yùn)輸 1 天，干冰-20℃運(yùn)輸一周。

提取：后續(xù) RNA 提取按 R213（或 R012）的說明書進(jìn)行。

3. RNA 純度及濃度檢測(cè):

血清/血漿的 RNA 含量特別低，已經(jīng)低于分光光度計(jì)測(cè)量的下限，無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量，因此無(wú)法通過測(cè)量 OD 值或者比值的方法來(lái)判斷濃度或者純度，只能通過下游做 RT-qPCR 來(lái)判斷產(chǎn)量。同時(shí)無(wú)細(xì)胞的血清/血漿中的 RNA 主要是小于 100 nt 的 miRNA，因此跑電泳檢測(cè) RNA 完整性并不適用于血清/血漿 RNA。

操作步驟

第一次使用前，先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3、70%乙chun中加入無(wú)水乙chun，加入量詳見瓶上的標(biāo)簽。

1. 每 250 μl 液體樣品 (血清、血漿、腦脊液等)，加入 750 μl 裂解液 RLS，用移液器反復(fù)抽打幾次，然后劇烈震蕩 15 sec，充分混勻。（液體樣品和裂解液 RLS 的終體積比總是 1：3）

注意：對(duì)于含有高污染物樣品（如全血樣品），可以用滅菌水按照 1：1的比例稀釋一倍后開始提取。

2. 將勻漿樣品在室溫下放置 5 min，使得核酸蛋白復(fù)合物wan全分離。

3. 加入 200 μl lv仿，劇烈振蕩 15 秒，并在室溫下放置 2 分鐘。

4. 于 4℃（或室溫）13，000 rpm 離心 10 分鐘。 樣品會(huì)分成三層：下層有機(jī)相、中間層、上層無(wú)色的水相，RNA 存在于水相中。水相層的容量大約為所加裂解液 RLS 體積的 70%。

5. 轉(zhuǎn)移上清（約 500 μl）至一個(gè)新的離心管中，加入 1.5 倍體積（750 μl）的無(wú)水乙chun，吹打混勻。

6. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl上清混合液至RNA吸附柱中，12,000 rpm離心1 min，倒棄濾液。重復(fù)此過程，直到上清混合液全部上柱。

7. 向 RNA 吸附柱內(nèi)加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙chun），12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

8. 向 RNA吸附柱內(nèi)加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙chun），12,000 rpm離心1 min，棄濾液。

9. 重復(fù)步驟 8 一次。

10. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 離心 2min，除去膜上殘留的乙chun。

11. 取出 RNA 吸附柱，放入一個(gè)新的 RNase-Free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加 30~50 μl RNase-Free ddH2O，室溫放置 1 min，12,000 rpm 離心 1 min，管底即包含 microRNA 的總 RNA。

附：microRNA 富集方法（僅僅提取 microRNA，不包含>200 nt 其它總

RNA 成份。一般不推薦）

注意：當(dāng)非特異擴(kuò)增較多或者擴(kuò)增背景較高時(shí)，可以嘗試使用富集方法提取的 microRNA。

1. 按照前面標(biāo)準(zhǔn)操作步驟 1－4 操作，直到得到上清。

2. 取上清（約 500 μl）至一個(gè)新的離心管，加入等體積 70％乙chun（必須是

室溫的），吹打混勻，不要離心。

3. 取700 μl上清混合液，加入一個(gè)RNA吸附柱中，12,000 rpm離心1 min，收集濾液。并將濾液轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的離心管，然后把 RNA 吸附柱放回空的收集管內(nèi)，再加入剩下的混合物，離心，收集濾液。

此時(shí)，濾液含有 microRNA, RNA 吸附柱的膜上是去除了 microRNA 的總RNA（mRNA、tRNA、rRNA 等大于 200nt 的 RNA），如果有需要，可以按照前面標(biāo)準(zhǔn)操作步驟 7－11 操作，漂洗、洗脫，得到去除了 microRNA 的總 RNA。

4. 較精確估計(jì)濾液體積，加入 0.65 倍體積無(wú)水乙chun（必須是室溫的），吹打混勻，不要離心。

5. 將≤750 μl濾液混合物加入microRNA吸附柱中，12,000 rpm離心1min，micoRNA 被吸附在膜上，倒棄廢液。重復(fù)此過程，直到所有溶液都上柱。

6. 按照前面標(biāo)準(zhǔn)操作步驟 7－11 操作，經(jīng)漂洗，洗脫后，得到富集的microRNA。

相關(guān)產(chǎn)品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾法）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（P418-25 + P419-500）

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