FlashPure Tissue/Cell Genomic DNA Kit

動物組織/細胞基因組 DNA ti取試劑盒（離心柱型）

組織/細胞基因組DNA快速提取試劑盒

目錄號:40017

產品內容：

自備試劑:

    無水乙chun，RNase A（可選）

保存條件:

    室溫（15~25℃）

    蛋白meiK，室溫可保存 6 個月，4℃保存 12 個月，- 20℃保存 2 年。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介:

    適用于從動物組織、培養細胞中快速提取高質量的基因組DNA。

    本試劑盒采用du特的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA，無需酚氯仿等 有毒試劑，也無需進行耗時的chun類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性 雜質，得到基因組DNA，無蛋白、核酸mei污染，可直接進行PCR、mei切和雜 交等相關分子生物學實驗。

產品特點:

1.    簡便快速：30 min 內可獲得高純度的基因組 DNA。

2.   安全無毒：無需苯fen/lv仿抽提。

3.   高純：OD260/280=1.7～1.9，長度可達 30～50 kb，可直接進行 PCR、 mei切和雜交等分子生物學實驗。

注意事項:

1.    如果裂解液TL、結合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴 溶解，搖勻后使用。

2.   開始實驗前將需要的水浴先預熱到70℃備用。

3.   洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游mei切、連接等反應。也可以使 用水洗脫，但應該確保批pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫 DNA應該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游 mei切反應，使用時可以適當稀釋。

操作步驟:

第一次使用前，請先在漂洗液 WB 中加入zhi定量無水乙chun，詳見瓶身的標簽。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進行。

1.    柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl 平衡液， 12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。 （請使用當天處理過的柱子）

2.    材料處理：

a.     動物組織

將動物組織在液氮中研磨成細粉（或者用解剖dao切成小碎塊），取約 25 mg 轉入 1.5 ml 離心管中，加入 180 μl 裂解液 TL，再加入 20 μl 蛋白mei K 溶 液，振蕩至che底懸浮，56℃水浴 1~3 小時，直至組織wan全消化溶解。

推薦樣本投入量：動物組織≤25 mg，動物脾臟≤10 mg。

鼠尾樣本投入量：大鼠尾巴最大用量為 0.6 cm 長片段，小鼠鼠尾巴最大 用量為 1.2 cm 長片段，并將裂解時間延長至 6-8 小時。

注意：水浴過程中，每 10 分鐘顛倒混勻一次，可促進細胞裂解。

b.    培養細胞

①  105~ 106懸浮細胞到一個 1.5 ml 離心管；對于貼壁細胞，應該先 用胰蛋白mei消化后吹打下來收集。

②  13, 000 rpm 離心 10 sec，吸棄上清，留下細胞團和大約 10~20μl 殘留的液體。

③  加入 200 μl 1× PBS，振蕩至細胞充分懸浮，洗滌細胞去除雜質， 13, 000 rpm 離心 10 sec，wan全吸棄上清。

④  再次加入 180 μl 1× PBS，振蕩混勻，使細胞che底懸浮。

⑤  加入 20 μl 蛋白酶 K 溶液，充分混勻。

3.    （可選步驟）加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液，振蕩混勻，室溫 放置 5 ~ 10min。

4.     加入200 μl結合液 CB，充分振蕩混勻，70℃水浴或金屬浴處理10 min。

5.     冷卻后加 100 μl 無水乙醇 (或異丙chun)，充分振蕩混勻，此時可能會出 現絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內壁水珠。

6.    將所得溶液和絮狀沉淀加入一個 DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中） 13, 000 rpm 離心 1 min，DNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。

7.    加入 500 μl 抑制物去除液 IR，13, 000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

8.    加入 600 μl 漂洗液 WB（請檢查是否已加入無水乙chun），13, 000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

9.    重復步驟 9 一遍。

10.   將 DNA 吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm 離心 2 min，盡量除去 漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙chun抑制下游反應。

11.   取出 DNA 吸附柱，放入一個干凈的 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央 加入 100 μl 洗脫緩沖液 EB （洗脫緩沖液事先在 80 ~ 100℃水浴中預 熱可以提高產量）， 室溫放置 3 ~ 5 min，13, 000 rpm 離心 1 min。

12.   DNA 可以存放在 2~ 8℃，如果要長時間存放，可以放置在-20℃。

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