2× FastHiFi PCR Master Mix (含染料)

Fast HiFi PCR Master Mix（含染料）

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產品內容

保存條件

-20℃保存，有效期 2 年。

經常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 個月。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

2× FastHiFi PCR Mix為多種采用zui先jin基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成，極大的提高了擴增長度、擴增速度、保真性和產量。2× FastHiFi PCR Mix是長片段、超保真、快速擴增的shou選產品。

PCR產物為平末端，不需要加A頭，可直接用金百特TOPO- Blunt平末端系列載體（Cat#V116、V117）克隆。

本產品包含FastHiFi DNA Polymerase、dNTPs和優化的反應緩沖液，濃度為2×。使用時，只需加入模板、引物，并補足水至Mix終濃度為1×即可。

本制品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳；也可經過純化處理，以用于酶切、連接、熒光測序等后續操作。

產品特點

1. 高產：一般 PCR 產物量比傳統產量高 50%-100%！

2. 高效：延伸速度可以達到 3-4kb/min，是 pfu 的 6-8 倍！

3. 高成功率：對于高 GC 模板和特殊結構的復雜模板有良好效果！

4. 超高保真：保真度是 taq 的 81 倍!

5. 擴增長度長：以復雜基因組 DNA 為模板擴增可達 3kb，以簡單基因組、質粒和噬菌體 DNA 為模板擴增可達 6kb。

2   × FastHiFi PCR Master Mix 使用說明：

一、配制 PCR 反應體系：(于冰上配制)

參考模板用量：（以 50 μl 反應體系為例）

質粒：0.1-10 ng；

細菌基因組：10-100 ng；

人類基因組：50-150 ng；

cDNA：1-5 μl from RT。

注意：實際操作中，首先要計算好需要補加 ddH2O 的量以后，建議先加水，然后按上述順序添加其它成分，最后加 FastHiFi PCR Mix，瞬離，上機。

二、設置 PCR 循環條件：（請根據實際情況適當調整）

注意：一般情況下，Annealing Temperature = Tm - 5°C

1. 質粒和簡單基因組等簡單模板，可以采用 10-15 sec/kb；復雜模板 ( 如人類 基因組 DNA )，可以采用 20-25 sec/kb。

2. 對于高 GC 含量的模板，預變性和變性溫度可以提高到 98℃。

3. 如果電泳發現主帶上下拖尾模糊現象，或者泳道出現從上樣孔拖下來的涂抹帶現象，一般提示延伸時間過長，梯度縮短延伸時間（建議 10-15sec/kb 為梯度減少延伸時間）直到獲得滿意結果。

三、結果檢測：反應結束后取 5 µl 反應產物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。

Fast HiFi PCR Master Mix（含染料）