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Script III RT MasterMix
( Perfect for qPCR )
Script III RT MasterMix 反轉錄試劑
目錄號:71518
產品內容
Components | 71518-50 50 rxns (20 μl/rxn) | 71518-100 100 rxns (20 μl/rxn) |
5x RT MasterMix | 200 μl | 400 μl |
RNase free H2O | 1.5 ml | 1.5 ml |
保存條件
-20℃保存，有效期 12 個月。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
產品簡介
Script III RT MasterMix為一管式逆轉錄預混液，含有逆轉錄所需的所有試劑：Script III Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、OligodT Primer、dNTP Mixture、RT Buffer。
只需加入RNA模板和RNase-Free H2O，15分鐘即可完成逆轉錄反應。 操作方便快捷，逆轉錄產物兼容染料法和探針法qPCR，用于檢測高拷貝或者低拷貝基因。
注意事項
1． 避免RNase污染。
2． 為保證反轉錄成功，建議使用高質量的RNA樣品。
3． 5x RT MasterMix含有甘油比較粘稠，容易吸附在管壁和吸頭外，導致損失，使用前請點甩離心后取用。5x RT MasterMix包含的酶過量，即使每次分別按照3.8 μl使用，也不影響使用效果。
4． 20 μl逆轉錄反應體系建議加入不超過1μg的Total RNA。如果目的基因的表達量非常低，最多加入5 μg Total RNA，否則，RNA量過高，可能會超出后續qPCR的線性范圍。
5． 本產品適用于包含Ploy (A)結構的真核生物mRNA和不包含Ploy (A)結構的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板。
6． 如果模板具有復雜二級結構或高GC區域，推薦使用變性步驟，即在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5 min后迅速轉移到冰上，再加RNA模板和RNase free H2O，混勻，50°C孵育15 min進行逆轉錄。
第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應體系為例)
重要提示：操作前，請將各組分輕彈混勻，點甩離心后置冰上備用。
1． 反應體系的配制
于冰上，在PCR管中，加入以下組分：
Components | Volume |
Total RNA / mRNA | 50ng ~ 1μg / 5ng ~ 100ng |
5x RT MasterMix | 4 μl |
RNase-free H2O | To 20 μl |
2． 輕柔吸打混勻，42℃孵育15 min，進行逆轉錄反應。
3． 85°C加熱5 sec，終止反應。
逆轉錄產物可立即用于qPCR反應，或保存于-20°C，并在半年內使用；長期存放，請分裝后存于-70°C。
qPCR
建議取1~2μl cDNA產物原液作為20μl qPCR反應體系的模板。
如果基因表達量比較高，請根據實際情況適當稀釋cDNA模板后使用。
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