甘油三酯（triglyceride, TG）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

TG 是長(zhǎng)鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細(xì)胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。

測(cè)定原理：

用異丙醇提取TG，脂蛋白酯酶水解 TG 生成甘油和脂肪酸（FFA），甘油與三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成 H2O2，過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化 4-氨基安替bi林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在 505 nm 處有特征吸收峰。

甘油三含量測(cè)定試劑盒   脂肪酸系列

組成：

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

TG 的提取：

1、組織中TG 的提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即TG 待測(cè)液。

2、細(xì)胞、細(xì)菌中 TG 的提取：先收集 400-500 萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，離心后棄上清，加 1ml 試劑一，超聲波破碎 1min（強(qiáng)度 20％，超聲 2s，停 1s），8000g，4℃離心 10min，取上清，即TG 待測(cè)液。

3、血清（漿）樣品：直接測(cè)定。

測(cè)定操作：

可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 505 nm。

混勻，室溫下靜置 20min，于 505 nm 波長(zhǎng)處讀取吸光值，記為 A 空白和A 測(cè)定，△A=A 測(cè)定-A 空白?？?/span>白管只需測(cè)一管。

計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.6522x - 0.0199； R² = 0.9979；x：標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml） y：吸光值差值ΔA。

1. 血清（漿）中甘油三酯含量計(jì)算：

TG 含量（mg/ml）=（ΔA+0.0199）÷0.6522=1.533×（ΔA+0.0199）

2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中甘油三酯含量計(jì)算：

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

TG 含量（mg/ mg prot）= (ΔA+0.0199)÷0.6522×V 樣÷(Cpr×V 樣）=1.533×（ΔA+0.0199）÷Cpr (2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

TG 含量（mg/ g 鮮重）=（ΔA+0.0199）÷0.6522×V 樣÷(W×V 樣÷V 樣總）=1.533×（ΔA+0.0199）÷ W

V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入試劑一體積，1 ml；W：樣本質(zhì)量，g； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開(kāi)后應(yīng)該及時(shí)蓋緊。

2. zui低檢出限為 100μg/ml。

甘油三含量測(cè)定試劑盒   脂肪酸系列