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果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP)試劑盒說明書
微量法 100 管/96 樣
果糖-1,6 二磷酸酶又稱果糖 1,6 二磷酸酯酶，催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和無機磷，在糖的異生代謝和光合作用同化物蔗糖的合成中起關鍵性的作用。
FBP 催化 1,6 二磷酸果糖和水生成 6 磷酸果糖和無機磷，在反應體系中添加的磷酸葡萄糖異構酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH，340nm 下測定NADPH 增加速率，即可計算 FBP 活性。
產品名稱 | BU6002-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：粉劑 | 1 瓶 | -20℃ |
試劑二：液體 | 7.2μl | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1 瓶 | -20℃ |
試劑四：液體 | 25ml | 4℃ |
說明書 | 一份 | |
試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 20ml 試劑四充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保存； 試劑二：液體 7.2μl×1 支，4℃保存；臨用前加入 1ml 蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保存；試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前加入 1ml 蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保存；
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理
①總FBP 酶提取：建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1ml 提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇 7s，總時間 1min），然后 4℃，8000g 離心 10min，取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP 酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5～10 的比例（建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1ml 提取液一），冰浴勻漿后于 4℃，200g 離心 5min，棄沉淀，取上清在 4℃，8000g離心 10min，取上清用于測定胞漿 FBP 酶活性，取沉淀加 1ml 提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時間 1min），然后 4℃，8000g 離心 10min，取上清測定葉綠體中FBP 酶活性。
建議測定總FBP 酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的 FBP，則按照步驟②提取粗酶液。
1、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 340nm，蒸餾水調零。
2、將試劑一、二、三 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)預熱 10 分鐘
3、加樣表：
試劑名稱(μl) | 測定管 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 10 |
試劑三 | 10 |
試劑一 | 160 |
將上述試劑按順序加入微量石英比色皿或 96 孔板中，立即混勻，加入最后一個試劑的同時開始計時，在340 nm 波長下記錄反應 1min 后吸光度A1 和反應 6min 后的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V 反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑， 1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g。
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g 組織每分鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義為一個酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=643×ΔA÷W
V 反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔板光徑， 0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.02ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g。
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