諾博萊德 酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒

酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒 常備現貨

產品貨號：P5029

產品名稱：酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒

規格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P5029 酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒

適用樣本：酵母

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產品簡介：

酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種酵母樣本中提取線粒體膜蛋白。提取過程簡單方便。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解線粒體膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的線粒體膜蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白，下游應用范圍廣，提取液裂解細胞的能力較溫和，需要根據實際樣本情況優化裂解時間。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的膜蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，需要透析、脫鹽后再用于2D電泳。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒、PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒、離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 提取液D在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時會導致不容易分層。

5. 膜蛋白電泳時loading buffer應該避免煮沸。

6. 膜蛋白電泳時可以提高 loading

二、酵母線粒體膜蛋白提取：

1. 提取液制備：

每 500μl 冷的酵母線粒體膜蛋白提取液 D 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取適量酵母培養物，在 4℃，1000×g 條件下離心 5-10 分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集酵母沉淀。

3. 用 PBS 洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 每 100-200ul 體積或 100-200mg 濕重酵母沉淀物中加入 400ul 酵母線粒體提取液 A，混勻后，在30℃條件下保溫 15 分鐘。

5. 在 1000×g 條件下離心 5-10 分鐘，收集酵母沉淀。

6. 酵母沉淀物中加入 500ul 酵母線粒體提取液 B，充分混勻后。

7. 在 37℃或室溫條件下輕微振蕩 30-90 分鐘。

8. 在 2000×g 條件下離心 5-10 分鐘，棄上清，收集沉淀。

9. 沉淀用 PBS 洗滌兩次。離心收集沉淀。

10. 在沉淀中加入 800μl 酵母線粒體提取液 C，充分混勻，然后在振蕩器上振蕩 15-30 分鐘。

11. 在 4℃，500×g 條件下離心 5 分鐘，棄沉淀，收集上清。

12. 將上清在 4℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘，棄沉淀，收集上清。

13. 將上清在 4℃，14000×g 條件下離心 20 分鐘。棄上清，收集沉淀。

14. 在沉淀中加入 200-400μl 冷的線粒體膜蛋白提取液 D，充分混勻。

15.在 2-8℃條件下振蕩 20-40 分鐘。

16. 在 4℃，12000×g 條件下離心 5 分鐘。

17. 將上清吸入另一干凈離心管，在 37℃水浴 5-10 分鐘。

18. 在 37℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘，此時溶液分為 2 層，小心移除上層部分，下層即為線粒體膜蛋白，約為 20-40ul。

19. 用 50-100ul 膜蛋白溶解液 E 溶解下層，即得酵母線粒體膜膜蛋白樣品。

20. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒 常備現貨

產品訂購信息：

P5029  酵母線粒體膜蛋白提取試劑盒  50T/100T