超微量總 RNA 快速提取試劑盒（帶 DNase I）

FlashPure Total RNA micro Kit(With DNase I)

微量/超微量樣品總RNA快速提取試劑盒

目錄號(hào)：91516

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無(wú)水乙chun

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

FlashPure Total RNA micro Kit是超微量總RNA提取的專(zhuān)用試劑盒，處理范圍一般為細(xì)胞（1~106）或者組織（< 5mg）。

適用于從超微量的細(xì)胞、組織、昆蟲(chóng)、植物、細(xì)菌等樣品中提取總 RNA。配有DNase I，在RNA吸附膜上消化gDNA，得到的RNA，無(wú)gDNA殘留，可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RACE等。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 特殊微量 10 μg 離心柱設(shè)計(jì)，可以zui低 6μl 洗脫，可提高 RNA 的濃度。

2. 特殊無(wú)墊圈離心柱設(shè)計(jì)，確保離心后無(wú)液體殘留和污染，保證 RNA純度。

3. du有的糖fen去除劑 PAD 可以清除植物多糖多fen或者昆蟲(chóng)的糖原，幾丁質(zhì)多糖等雜質(zhì)，提高富含雜質(zhì)的昆蟲(chóng)和植物 RNA 的提取質(zhì)量。

4. 無(wú)毒：免lv仿、免β-巰基乙chun！

5. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

6. 高效：提取全過(guò)程僅需 30 min！

注意事項(xiàng)：

1. 所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行。

2. 部分含多糖多fen、幾丁質(zhì)多糖或者次級(jí)代謝產(chǎn)物豐富的昆蟲(chóng)樣品，或者植物樣品，提取效果不佳（如降解）可以嘗試在裂解液 PRL 中添加糖fen去除劑 PAD 后提取。具體添加比例為 10 體積（1ml）PRL：1 體積（100μl）糖fen去除劑 PAD。

3. 不是多糖多fen的材料不用加糖fen去除劑 PAD。

操作步驟

第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液 RW 中加入zhi定量無(wú)水乙chun，詳見(jiàn)瓶身的標(biāo)簽。

提示：

(一) 樣品裂解勻漿：

a．組織（動(dòng)物、植物、昆蟲(chóng)）：≤5 mg 組織加入 300 μl 裂解液 PRL，勻漿至無(wú)明顯組織塊。

b．貼壁細(xì)胞：無(wú)需消化，wan全吸棄培養(yǎng)基后，直接在培養(yǎng)板/皿中加入裂解液 PRL 裂解細(xì)胞，并用移液槍反復(fù)吹打，幫助裂解。

（≤10⁵ 細(xì)胞加 100μl 裂解液 PRL，≤10⁶ 細(xì)胞加 300μl 裂解液 PRL）。

c．懸浮細(xì)胞：離心沉淀細(xì)胞(≤500 x g)，wan全去除上清后用裂解液PRL 重懸細(xì)胞沉淀。可短暫渦旋振蕩。

d．其它組織：其他難裂解的組織，細(xì)菌，酵母，植物勻漿需配合高速珠磨均質(zhì)儀器和適合裂解珠（玻璃珠，鋼珠，鋯珠等）。

(二) 樣品清理：

此步驟為可選步驟，主要是針對(duì)動(dòng)植物組織和細(xì)胞，若研磨勻漿后不溶物碎片太多，可將裂解物 12,000 rpm 離心 1 min，沉淀裂解困難的碎片或者不溶物，將上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml 離心管中。對(duì)于樣品量很低（細(xì)胞數(shù)≤105）)或勻漿后能充分裂解的樣品無(wú)需此步驟。

(三) 樣品純化：

1. 向裂解物或上清中加入等體積的無(wú)水乙chun到上一步的中吹打混勻。

2. 將上一步的混合液加入超微量 RNA 吸附柱（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。此時(shí)，RNA 被吸附在膜上。

3. 加入 350 μl 去蛋白液 RW1，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

4. DNase I 工作液配制：取 20 μl DNase Buffer 和 2 μl DNase I 至新的RNase-Free 離心管中，輕輕吹打混勻。（處理多個(gè)樣品，按照比例放大）

5. 向 RNA 吸附膜中央加入 22 μl 的 DNase I 工作液，室溫放置 15 min。

6. 加入 350μl 去蛋白液 RW1，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

7. 加入 500μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

8. 重復(fù)步驟 7 一次。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙chun。

10. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央部位懸空滴加 30-50μl RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

11. 提取的總 RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，以免降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

附錄：

一、液氮研磨（自動(dòng)研磨儀）—— 適用于各種樣本

a. 把研磨模塊也丟到液氮中預(yù)冷，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢。

b. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3 mm 鋼珠 3 粒，放進(jìn)≤50 mg 樣本，投入液氮中預(yù)冷。

c. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中，放進(jìn)研磨儀，設(shè)置 55 個(gè)頻率， 震蕩 30~60 sec。（以北京赫得京 N9548 為例）

d. 研磨完成后，馬上加 550 μl 裂解液 RLA，劇烈渦旋 30 sec，混勻。

e. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

二、免液氮直接研磨（自動(dòng)研磨儀）—— 適用于新鮮樣本

a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中加入 5 mm 鋼珠 1 粒，加 1 ml 裂解液 RLA，放進(jìn)≤100 mg 樣本，設(shè)置 60 個(gè)頻率，震蕩 2 min。

b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

微量/超微量樣品總RNA快速提取試劑盒