Universal miRNA Mini Kit

通用型 microRNA 快速提取試劑盒

通用型microRNA快速提取試劑盒

目錄號：91015

產品內容

自備試劑

無水乙chun

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

裂解液 RL 是 RNAzol (Trizol )，配合 miRNA 專用的溶液體系，專用于快速提取各種細胞、動物、植物、真菌、昆蟲、細菌、微生物等樣品的 miRNA和其它各種小 RNA(15-30 nt)。

可以提出來包含 micoRNA 的總 RNA，用于 microRNA 的 RT、qPCR檢測，以及全轉錄組測序等；根據需要，也可以一次性把 microRNA 和總 RNA（mRNA、tRNA、rRNA）分別提出來。

但是市場上常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit 不能有效吸附回收miRNA，Trizol 沉淀抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA（生物通上有專題文章闡述）。

產品特點

1. 本公司生產的 Universal miRNA Kit 質量優異，可以wan美替代 Qiagen 的miRNeasy Mini kit。

2. 可在常溫下提取 RNA，不需要 4℃離心機；亦可以兼容 4℃離心機。

注意事項

1. 采集 RNA 樣本時，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液，Cat#91115-100)中，可在 37℃保存一天，可在 25℃保存一周，可在 4℃ 保存一個月，在-20℃或者–80℃長期保存。

2. 樣品應避免反復凍融，否則會影響 RNA 的提取得率和質量。

3. 樣品加入裂解液 RL（RNAzol）勻漿后，加lv仿前，樣品可在–80℃保存一個月以上；提取過程中應使用不含 RNase 的吸頭和器皿。

重要提示：

① 第一次使用前, 先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3 中加入

zhi定量無水乙chun，詳見瓶上的標簽。

② 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進行，提取效果更佳！

操作步驟（可得到包含 miRNA 的總 RNA）

1. 材料處理：

a．組織（動物、植物、真菌）：將組織在液氮中磨成細粉。取適量細粉加

入 1 ml 裂解液 RL，劇烈渦旋震蕩，充分混勻。

樣品投入量：動物組織為 30~50 mg；植物/真菌為：50~100 mg。

b．單層貼壁培養細胞：吸去培養液，直接在培養皿/瓶中加入適量裂解液RL，每 10cm2 加 1ml 裂解液 RL，用移液器反復抽打幾次，幫助裂解。

c． 懸浮細胞：離心收集細胞，吸棄上清，每 5×106個細胞加 1ml 裂解液RL。加裂解液 RL 前不要洗滌細胞，以免降解 RNA。

d．血液：取新鮮血液，加入 3 倍體積裂解液 RL，充分振蕩混勻。（推薦0.25 ml 血液+0.75 ml 裂解液 RL）

2. 將裂解物在室溫下放置 5 min，使得核酸蛋白復合物wan全分離。

3. 加入 200μl lv仿，劇烈振蕩 15 秒，并在室溫下放置 2 分鐘，

4. 13,000 rpm 離心 10 分鐘。

5. 吸取 500 μl 上清轉入新的 2.0 ml 離心管中，加入 1.5 倍體積（750 μl）的無水乙chun，吹打混勻。

6. 每次轉移≤750 μl上清混合液至RNA吸附柱中，12,000 rpm離心1 min，倒棄濾液。此時 RNA 被吸附在膜上，重復此過程，直到所有溶液都上柱。

7. 向 RNA 吸附柱內加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙chun），12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

8. 向 RNA 吸附柱內加入 500 μl Wash Solution 2/3（是否已加入乙chun），12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

9. 重復步驟 8 一次。

10. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 離心 2 min，除去乙chun。

11. 取出 RNA 吸附柱，放入新的 RNase-Free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加50~100μl RNase-Free ddH2O，室溫放置1min，12,000rpm離心1min，管底即：包含microRNA的總RNA。

12. 得到的 RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。

附：microRNA 富集方法（僅僅提取 microRNA，不包含>200 nt 其它總RNA 成份。一般不推薦）

注意：當非特異擴增較多或者擴增背景較高時，可以嘗試使用富集方法提取的microRNA。

1. 按照前面標準操作步驟 1 ~ 4 操作，直到得到上清。

2. 吸取 500 μl 上清至新的 2.0 ml 離心管，加入等體積 70％乙chun（必須是室溫的），吹打混勻。

3. 吸取 700 μl 上清混合液，加入一個 RNA 吸附柱中，12,000 rpm 離心 1min，收集濾液。并將濾液轉移至一個新的離心管，然后把 RNA 吸附柱放回空的收集管內，再加入剩下的混合物，離心，收集濾液。

此時，濾液含有 microRNA, RNA 吸附柱的膜上是去除了 microRNA 的總RNA（mRNA、tRNA、rRNA），如果有需要，可以按照前面標準操作步驟7－11 操作，漂洗、洗脫，得到去除了 microRNA 的總 RNA。

4. 較精確估計濾液體積，加入 0.65 倍體積無水乙chun（必須是室溫的），吹打混勻，不要離心。

5. 將≤750 μl 濾液混合物加入 microRNA 吸附柱中， 12,000 rpm 離心 1min，micoRNA 被吸附在膜上，倒棄廢液。重復此過程，直到所有濾液混合物都上柱。

6. 按照前面標準操作步驟 7－11 操作漂洗，洗脫得到富集的 microRNA。

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